Kao dobavljač detektora fluorescencije, proveo sam fer količinu vremena razmišljajući o IS-u i izlazima ovih sjajnih uređaja. Detektori fluorescencije su super korisni u svim vrstama polja, od medicinskih istraživanja do praćenja okoliša. Oni rade otkrivajući svjetlost da se fluorescentna supstanca emitira nakon uzbuđenja određenom valnom dužinom svjetlosti. Ali kao i svaki komad tehnologije, oni imaju svoja ograničenja. Zaronimo u ono što su to.
Osjetljivost i pozadinski šum
Jedna od glavnih ograničenja detektora fluorescencije je osjetljivost. Dok su uglavnom prilično dobri u pokupljanju fluorescentnih signala, postoji ograničenje koliko mali signal mogu otkriti. Ovo je velika stvar kada radite sa uzorcima koji imaju vrlo niske koncentracije fluorescentne supstance. Detektor možda neće moći razlikovati slab signal iz pozadinske buke.
Pozadinska buka u osnovi je da detektor podiže to nije iz fluorescentne supstance koje vas zanima. Može doći iz gomile izvora, poput lutalice u laboratoriji, automatsko ometanje iz uzorke matrice ili električne buke u samom električnom zvuku. Ova buka može zaista učiniti da se zaista precizno mjeri fluorescentni signal, posebno kada je slab.
Na primjer, u nekim medicinskim dijagnostičkim testovima možda ćete tražiti vrlo malu količinu određenog biomarkera u uzorku krvi pacijenta. Ako osjetljivost detekovatora nije dovoljno visoka, možda će propustiti biomarker, što je dovelo do lažnog negativnog rezultata. A ako je pozadinska buka previsoka, mogla bi dati lažni pozitivni rezultat, čineći da se čini kao da je biomarker prisutan kada nije.
PhotoBreachting
PhotoBreachting je još jedna velika ograničenja. Kada je fluorescentna molekula izložena svjetlosti, može proći hemijsku promjenu zbog kojeg gubi sposobnost fluoresce. To se naziva fotografijama, a može biti pravi problem u deteciji fluorescencije.
Intenzivnija svjetlost koja se koristi za uzbunu fluorescentna supstanca, može doći do bržeg fotoblea. I nakon što se molekuli izbijeli, ne možete dobiti fluorescentni signal nazad. Ovo može biti veliko pitanje u dugoročnim eksperimentima ili kada trebate snimiti više mjerenja s vremenom.
Recimo da koristite fluorescentni detektor za proučavanjem kretanja fluoresceshentno označenog proteina u živoj ćeliji. Ako svjetlost iz detektora uzrokuje prebrzo, prebrzo nećete moći pratiti protein. Možda ćete dobiti samo nekoliko snimka svog početnog položaja prije nego što fluorescencija nestane.
Postoje neki načini za pokušaj i smanjenje fotografija s smanjenjem, poput korištenja nižih intenziteta svjetlosti ili dodavanjem agenata za izbjeljivanje u uzorak. Ali ova rješenja nisu uvijek savršena, a fotografija i dalje može ograničiti korisnost detektora fluorescencije u određenim aplikacijama.
Ograničeni raspon talasnih dužina
Većina detektora fluorescentnosti imaju ograničen raspon talasnih dužina koje mogu otkriti. Svaka fluorescentna supstanca ima određenu valnu dužinu i emisiju, a ako detektor ne može pokriti relevantne valne duljine, neće moći otkriti fluorescentnost.
Na primjer, neke nove fluorescentne boje razvijaju se s jedinstvenim pobuđivačem i emisijskim spektrom koji su izvan raspona tradicionalnih detektora fluorescentnosti. Ako radite s ovim novim bojama, možda će vam trebati detektor šireg raspona talasne dužine.
Ovo ograničenje može biti i problem kada pokušavate istovremeno otkriti višestruke fluorescentne tvari. Različite tvari obično imaju različite talasne dužine emisija, a ako detektor ne može pokriti sve njih, nećete moći istovremeno mjeriti sve tvari.
Smetanje drugih supstanci
Osobi mogu utjecati detektori fluorescencije drugih tvari u uzorku. Neke tvari mogu ugasiti fluorescenciranje ciljne molekule. KUTANJE JE KADA MOLEKULA SMIJE SMANJENU FLUORESCENCIJE DRUGI MOLESE KROZ FIZIČKE ILI Kemijske interakcije.
Na primjer, određeni metalni joni ili drugi hemijski spojevi u uzorku mogu se vezati za fluorescentne molekule i mijenjati njegovu strukturu na način koji smanjuje njegovu sposobnost fluoresce. To može dovesti do podcjenjivanja koncentracije ciljane supstance.
U nadzoru životne sredine ako pokušavate otkriti fluorescentni zagađivač u uzorku vode, mogu postojati i druge tvari u vodi koja može utapati fluorescencija zagađivača. To bi se moglo učiniti kao da je zagađivač prisutan u nižoj koncentraciji nego što je zapravo.
Temperatura i pH osjetljivost
Svojstva fluorescencije mnogih tvari su osjetljiva na temperaturu i pH. Promjena temperature ili pH može utjecati na strukturu fluorescentne molekule, što zauzvrat može promijeniti pobudu i emisijske spektre, kao i intenzitet fluorescencije.
Ako temperatura ili pH uzorka ne kontroliraju pravilno, ona može dovesti do netačnih rezultata. Na primjer, u biološkom uzorku pH može varirati ovisno o međuspremnici korištenoj ili metaboličkoj aktivnosti ćelija. Ako detektor fluorescencije nije kalibriran za ove promjene, može dati netačna mjerenja.
Recimo da koristite detektor fluorescencije za mjerenje pH rješenja pomoću pH - osjetljive fluorescentne boje. Ako temperatura rješenja mijenja se tijekom mjerenja, može utjecati na fluorescenciranje boje, što daje netačno čitanje pH.
Trošak i složenost
Detektori fluorescencije mogu biti prilično skupi, posebno visoki - krajnji modeli s naprednim funkcijama poput visoke osjetljivosti i širokim rasponom talasne dužine. Troškovi kupovine i održavanja ovih detektora može biti glavna prepreka za neke istraživačke laboratorije ili mala preduzeća.
Pored troškova, detektori fluorescencije također mogu biti složeni za rad. Često su potrebni specijalizirani trening za postavljanje, kalibraciju i rješavanje problema. A ako nešto pođe po zlu, to može biti teško i vrijeme - konzumirati.
Na primjer,Izotermni detektor fluorescencijeiDigitalni izotermni detektor fluorescencijesu napredni uređaji koji nude visoko - otkrivanje fluorescencije performansi. Ali njihova složenost znači da korisnici trebaju dobro razumjeti tehnologiju kako bi se maksimalno izvukao.
Zaključak
Uprkos tim ograničenjima, detektori fluorescencije i dalje su nevjerojatno vrijedni alati u mnogim poljima. U našoj kompaniji stalno radimo na prevladavanju tih izazova i poboljšanju performansi naših detektora. Razvijamo nove tehnologije za povećanje osjetljivosti, smanjiti pozadinsku buku i minimiziranje fotoblea.
Ako ste na tržištu za detektor fluorescencije, ili ako imate bilo kakvih pitanja o tome kako raditi oko ovih ograničenja u svojoj konkretnoj aplikaciji, ne ustručavajte se da se obratite. Ovdje smo da vam pomognemo da pronađete najbolje rješenje za vaše potrebe. Bilo da ste istraživač u velikom laboratoriju ili malog vlasnika preduzeća koji traže pouzdan sistem detekcije, imamo stručnost i proizvode koji će vas podržati. Razgovarajmo o tome kako možemo napraviti detekcije fluorescencije za vas.
Reference
- Lakowicz, JR (2006). Principi fluorescentne spektroskopije. Springer Science & Business Media.
- Valeur, B. (2002). Molekularna fluorescencija: principi i aplikacije. Wiley - vch.