"Hibridni papir / PDMS mikrofluidični uređaj integriran sa Extraction-om i pojačanjem rekombinase polimeraze za otkrivanje norovirusa u hrani Express
Norovirus (Hunov) pripada porodici Caliciviridae i primarno se prenosi kroz kontaminiranu hranu. To je vodeći uzrok akutnog gastroenteritisa.
Virusne bolesti Instituta za damu Davis na Univerzitetu McGill u Kanadi zajednički je objavio istraživanje na srodnom studiju za otkrivanje. Istraživački tim razvio je mikrofluidijski uređaj na bazi origama i koristio Murine Norovirus 1 (MNV -1) za niz ispitivanja eksperimenata. Uređaj apsorbira RNA pomoću papirne trake, pojačava RNA koristeći Mira Multi-enzimsku izotermnu tehnologiju brzog pojačanja nukleinske kiseline i vrši analizu bočne protoke na traci papira. Čitav postupak otkrivanja i rezultati su vizualizirani, a test je završen u roku od 35 minuta, postizanje 100% specifičnosti i ograničenje otkrivanja od 200 PFU / ml. Ovaj uređaj pokazuje značajan potencijal za otkrivanje virusa s hranom u poljoprivrednim proizvodima, posebno u udaljenim i ograničenim sredinama.
Eksperimentalna metoda
Trake za celulozne papire apsorbirane MNV -1 RNA, koje je tada pušteno u Mira reagens. RNA je bila prva prepisana u obrnutu u komplementarnu DNK (CDNA), a zatim pojačana u dvostruko nasučena DNK (DSDNA). Nakon toga, sonde posebno veže za ciljni niz. Nakon što je ostatak tetrahidrofurana (THF) cijepljen Endonuclease IV, preostali pramca je proširila polimeraza za proizvodnju kompletne amplikone. Amplikofon je zarobljen i vizualiziran kao promjena boje na T-liniji.
(Šematski dijagram eksperimentalnog principa)
Razvojna dostignuća
(Šematski dijagram papira / PDMS mikrofluidičkog uređaja)
Istraživački tim razvio je sklopivi papir / PDMS mikrofluidični uređaj koji integrira više funkcija, uključujući ekstrakciju nukleine kiseline, izotermne nukleinske amplifikacije i otkrivanje vizuelnog otkrivanja. Ovaj uređaj bez evljiva integrira cijeli proces, od pripreme uzoraka do krajnjeg otkrivanja MNV-a -1.
Microfluidic uređaj dovršava otkrivanje u roku od 35 minuta, sa ograničenjem otkrivanja od 200 PFU / ml. Cijena svakog mikrofluidičkog uređaja izračunava se da iznosi 6,76 dolara, što ga čini najisplativijim metodama među svim poznatim metodama otkrivanja koje koristi istraživački tim.
Eksperimentalni značaj
Istraživački tim je dalje ocijenio izvedbu ovog mikrofluidičkog uređaja za otkrivanje MNV-a -1 u salati i maline. Uveli su sirove MNV -1 Ekstrate u svježe poljoprivredne uzorke, eliminirajući potrebu za složenim koracima i pročišćavanjem virusa RNA. Uređaj je otkrio 170 PFU / G u salati i 230 PFU / G u maline.
(Osjetljivost MNV-a -1 detekcije u zelenilo i maline pomoću mikrofluidičkog uređaja)
Tradicionalne molekularne metode za otkrivanje virusa u hrani, poput PCR-a i QPCR-a zahtijevaju viruse visoke čistoće, što čini proces virusa, koncentracije i pročišćavanja iz kompleksa matrice hrane. Uz to, tradicionalne metode zahtijevaju kompliciranu, glomazna i skupu opremu, čineći ih neprikladnim za upotrebu u okruženjima ograničenim resursima.
Ovaj uređaj ima značajnu vrijednost za brzo otkrivanje lonova i drugih virusa s hranom u lancu opskrbe hranom.
Informacije o članku
Časopis: Primjena i mikrobiologija okoliša
Naslov članka: Hibridni papir / PDMS mikrofluidični uređaj integriran sa Ekstracijom RNA i pojačanjem rekombinase za otkrivanje norovirusa u hrani
Faktor uticaja: 3.9
Istraživački tim: Centar za virusne bolesti, Institut Lady Davis, Univerzitet McGill