Akutne respiratorne infekcije su uobičajene respiratorne bolesti kod djece, često uzrokovane virusima. Respiratorni sincitijski virus (RSV) i respiratorni adenovirus (adv) su dva zajednička patogena koji uzrokuju akutne respiratorne infekcije kod djece. Blagi slučajevi mogu prouzrokovati uobičajene hladne simptome kao što su kašalj i curenje iz nosa, dok teški slučajevi mogu uzrokovati teške komplikacije kao što su pneumonija i otitis medij. Prema preporukama Svjetske zdravstvene organizacije, otkrivanje patogena mora biti brz, precizan, osjetljiv i specifičan i ne smije se osloniti na specijalizirane tehničare ili velike instrumente. Stoga je posebno važno razviti metodu otkrivanja za RSV i AdV-a koji mogu udovoljiti gornjim zahtjevima za otkrivanje.
Istraživačka grupa MA Donglija Instituta za dječju bolnicu Shenzhen Objavio je član "Multipleks rekombinaza pojam pojačanja u kombinaciji sa Crispr / Cas12a za otkrivanje respiratornog sincitial virusa i respiratornog adenovirusa" u časopisu "naučni izveštaji", sa faktorom uticaja 4.6.
Pregled istraživanja
Multi-enzimska izotermalna tehnologija pojačanja nukleinske kiseline Mira kombinirana je s Crispr / CAS sistemom za otkrivanje. Projektirajući Mira Primers i Crispr Rnas (Crrnas), obavljajući višestruke usporedbe u više sekvenci, optimiziranje reakcijskih uvjeta i korištenjem fluorescentnih numeričkih uređaja za otkrivanje za provjeru osjetljivosti i specifičnosti.
I koristeći QPCR rezultate kao kontrolu usporedbe, proučavano je dosljednost rezultata ispitivanja od 160 kliničkih uzoraka za brisanje grla.
Eksperimentalni rezultati
1. Osjetljivost i specifičnost metode otkrivanja Mira-Crispr / CaS12A
U otkrivanju Mira metoda RSV-F1 / R1 primerni par koristi se za pojačavanje nukleinskih kiselina iz uzoraka uzoraka grla u obliku RSV, adv, PIV, RSV, MP, CP, FLUB, HMPV, Flui ili RSV / ADV suficijene pacijente. Osim RSV-a i adv-a, koji su imali pojačane bendove, ostali su rezultati bili negativni, što ukazuju na to da odabrani mira prajmeri nisu unakrsno reagirali s drugim osam patogena testiranim i bili su dobro očuvani.
Nakon toga, RSV i adv rekombinantni plazmidi razrjeđeni su 10-do 10 godina koristeći sterilnu vodu, a ograničenja otkrivanja za RSV i adv-a bile su oboje 106Kopije / ml.
(1-10: uzorci grla sa pacijenata sa RSV, RSV / AV infekcije i drugim respiratornim uzorcima patogena)
2. Usporedite sa QPCR-om
U usporedbi s QPCR metodom, ograničenja otkrivanja RSV i AdV su 103 primjeraka / ml
(Osjetljivost QPCR otkrivanja RSV-a i adv-a)
Metoda Mira-CrisPR pogodnija je za laboratorije široke, sa kratkim vremenom otkrivanja, jednostavnim radom i nema potrebe za velikim QPCR instrumentima za dovršavanje eksperimentalnih operacija.
3. Usporedba kliničkih uzoraka
Uzorci obloga grla prikupljeni su od 160 djece sa akutnim respiratornim infekcijama. Istovremeno, Mira-CrisPR metoda i QPCR metoda korišteni su za otkrivanje, a rezultati su upoređeni sa rezultatima kliničkog ispitivanja.
U usporedbi s QPCR metodom, osjetljivost Mira-CrisPR metode za RSV i adv bi bila 98,1%, a 91,4%, a specifičnost otkrivanja bila je 1 0 0%. Vrijednost Kappe veća je od 0,95, što ukazuje na visok stupanj dosljednosti.
Metoda Mira-CrisPR-a ima prednosti brzog, osjetljivog i specifičnog otkrivanja RSV-a i adv. Može otkriti virusne infekcije odmah i precizno, a pogodnije je za upotrebu u područjima sa oskudnim medicinskim resursima.