RPA-CRISPR/Cas12a sistem u ovoj studiji postiže brzo (30-40 min), ultra-osetljivo (1 kopija/μL) HCMV detekciju ciljanjem na rani-izraženi UL123 gen, nadmašujući konvencionalne metode u kliničkom testiranju uzoraka. Ova inovacija omogućava posebno{9} pravovremenu dijagnozu{9} infekcije{9} kod imunokompromitovanih pacijenata, i naglašava izvodljivost dijagnostike zasnovane na CRISPR-u za poboljšanje liječenja bolesti povezanih s HCMV-. Jednostavnost i efikasnost testa ističu njegov potencijal kao-alata za{15}}brigu za postavke-ograničenih resursa.
Obrasci RPA amplifikacijskih mjesta i odabir kompleta.
(A) RPA dizajn prajmera s obzirom na lokaciju fragmenata amplifikacije. Strelice pokazuju osnovne pozicije od početka do kraja amplificiranog fragmenta s prajmerima P1-P6.
(B) Slika elektroforeze u agaroznom gelu proizvoda RPA pojačana sa 6 HCMV setova prajmera.
(C) Provjera efikasnosti amplifikacije RPA kompleta različitih kompanija. P: Primer, NC: Negativna kontrola.
Rezultati su pokazali da je komplet AmpFuture pokazao najveću efikasnost pojačanja.
Poređenje pozitivnih stopa MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - metode fluorescentne sonde i qPCR u kliničkim uzorcima.
Prikupili smo uzorke krvi i urina od 48 kliničkih pacijenata. Genomska DNK je ekstrahovana iz ovih uzoraka korišćenjem TIANamp Genomic DNK kompleta, a rezultati detekcije UL122 analizirani su metodom PCR{3}}fluorescentne sonde. Uspoređujući naše rezultate s kliničkim dijagnozama, naše metode su identificirale 6 pozitivnih uzoraka koji su bili negativni u kliničkim testovima.
